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      C1q作用知多少

      2018-09-21
      作者:贺芸芬博士    王亚丽  博士   韩震

      在上一期的介绍中,我们介绍了治疗性抗体与Fc受体结合的必要性和常用的检测手段。同时也提到,抗体的Fc端除了和Fc受体结合外,还和C1q结合启动CDC(complement-dependent cytotoxicity)。先来简单介绍一下CDC和C1q吧。


      补体系统是人和脊椎动物在长期进化过程中获得的非特异性免疫系统,也在特异免疫中发挥作用,含有30多种可溶性蛋白和膜蛋白,即补体。补体可以被抗原抗体复合物或其他细胞外来物所激活,导致外来入侵物的裂解或被吞噬。补体通过三条即独立又交叉的途径被激活,即经典途径、旁路途径和凝集素途径,这三条途径形成了完整的补体系统(图1)。CDC是补体参与的细胞毒性作用,即补体系统的经典途径。抗体和补体C1q首先结合,接着补体C2-C9被激活形成攻膜复合物(MAC)对靶细胞发挥裂解作用。很多的抗体都可以引起CDC作用,如CD20、CEA等的抗体。


      图1. 由Fc端驱动的ADCC和CDC作用机制


      CDC除了细胞检测之外,也成了众多抗体药体外检测的必检项,常规检测的方法为ELISA, 但是ELISA为终点技术无法得到解离速率,而且IgG和C1q的结合较弱,而ELISA方法中的洗涤过程,可能会把一些弱结合的C1q洗掉,导致结果中出现假阴性,从而引起通过ELISA检测的体外C1q结合实验与实际CDC效应不符合。现在越来越多的企业选择SPR和BLI的技术检测抗体和C1q的相互作用,这两种方法不但稳定而且可直接得出亲和力和动力学。在2015年的报道中,利用protein L捕获抗体,检测抗体和C1q的相互作用如图2。 在近期的报道中也介绍了利用BLI技术,通过链霉亲和素(SA)传感器固化抗体,来检测抗体和C1q的相互作用如图3 。


      图2.Biacore 检测不同抗体和C1q的亲和力和动力学




      图3. BLI 检测不同抗体和C1q的亲和力和动力学


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      参考文献:

      1、Tsuguo Kubota et.al., Engineered therapeutic antibodies with improved effector functions. Cancer Science 2009; 100: 1566–1572.

      2、Rekha Patal et.al., IgG subclass specificity to C1q determined by surface Plasmon resonance using Ptotein L capture technique.Analytical Biochemistry 2015;479:15-17.

      3、Wei zhou et.al., Characterization of Antibody-C1q Interactions by Biolayer Interferometry. Anal Biochem. 2018 ;549:143-148.

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